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发光菌试剂盒操作流程
1、样品渗透压调节:每个样品取1mL,各加入0.1mL渗透压调节液,轻轻摇匀。
2、菌体复苏:取出一瓶冷冻的发光菌冻干粉,立即加入2-3mL冷藏的菌体复苏液(4C),轻轻摇匀后敞口。室温下(如20°C)平衡4-10min。
3、添加菌液:若样品数量为N,则准备N+2支测试管(第1、2支分别为阴性、阳性对照)。向每支测试管中各加入0.1mL菌液。依次测试各测试管中菌液的初始发光强度值(注:有的设备不需要测试初始值)。
4、添加样品及反应:向第1、2支测试管中分别加入0.9mL阴性、阳性质控液。其余对应加入0.9mL经过渗透压调节后的样品。摇匀,反应15min。
5、测试:反应完毕后,依次测试各管终发光强度值。仪器自动计算抑制率、每性叶放和除仪器背景值)。行计算抑制率。(各个发光强度值应扣除仪器背景值)。
6、有效性分析:阳性质控液为10mgL的ZnSO47HzO溶液(Zn*的浓度约为2.0mgL),含2% NaCl。抑制率应大于20%。阴性质控初始发光强度值应大于一定值(视不同厂家仪器而定)。
注意事项
1、收到试剂盒后,发光菌冻干粉置于-12C冷冻保存;菌体复苏液及阳性质控液置于4C冷藏保存。
2、菌液复苏后,需在8小时内完成测试,否则需重新复苏一瓶冻干发光细菌。
3、若有必要,请提前处理样品的pH值、色度、浊度(悬浮物)、余氯等干扰因素。