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发光菌诊断法,是指通过检测发光菌的发光强度反映检测体系中毒性或污染状况的一种方法。其原理是发光细菌在正常的生理条件下能发出波长在450〜490nm的蓝绿色可见光,在一定的试验条件下发光强度是恒定的,与外来受试物接触后,由于毒物具有抑制发光的作用,发光细菌的发光强度即有所改变,变化的程度与受试物的浓度在一定范围内呈相关关系,同时与该物质的毒性大小有关。
该方法检测污染物含量的检测范围比较大,灵敏度比较高,在较低浓度就可以检测到污染物的生物有效毒性,且有毒物质仅干扰发光细菌的发光系统,具有快速、简便、灵敏、成本低、检测下限低等优点。目前有三种发光细菌常用于发光菌诊断:明亮发光杆菌、费氏弧菌、青海弧菌。
湖南碧霄科技是一家以清华先进技术和高尖端人才为依托的高新技术企业,具有强大的技术研发、创新能力和生产能力。我司发光细菌试剂盒TOX-kit 400的操作流程如下:
1、样品渗透压调节:每个样品取1mL, 各加入0.1mL渗透压调节液,轻轻摇匀。
2、菌体复苏:取出-瓶冷冻的发光菌冻干粉,立即加入2-3mL冷藏的菌体复苏液(4°C),轻轻摇匀后敞口。室温下(如20°C)平衡4-10min。
3、添加菌液:若样品数量为N,则准备N+2支测试管(第1、2支分别为阴性、阳性对照)。向每支测试管中各加入0.1mL菌液。依次测试各测试管中菌液的初始发光强度值(注:有的设备不需要测试初始值)。
4、添加样品及反应:向第1、2支测试管中分别加入0.9mL阴性、阳性质控液。其余对应加入0.9mL经过渗透压调节后的样品。摇匀,反应15min。
5、测试:反应完毕后,依次测试各管终发光强度值。仪器自动计算抑制率、毒性评级等;或依照相关标准自行计算抑制率。(各 个发光强度值应扣除仪器背景值)。
6、有效性分析:阳性质控液为10mg/L的ZnSO4 7H2O溶液(Zn2*的浓度约为2.0mg/L),含2% NaCl。抑制率应大于20%。阴性质控初始发光强度值应大于一定值(视不同厂家仪器而定)。